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亚硝酸诱变选育黄原胶高产菌株初探

发布日期:2015-07-11 12:45:24

亚硝酸诱变选育黄原胶高产菌株初探

黄原胶是由黄单胞菌产生的一种微生物高分子酸性胞外杂 多糖,在食品、石油、医药、日用化工等十几个领域有着极其 广泛的应用。国内现有的产黄原胶菌种的黄原胶产率不高,制 约了黄原胶生产厂家的经济效益,使这些厂家在与国外黄原胶 生产厂家的竞争中处于劣势。筛选并对黄单胞菌进行诱变育种, 是提高黄原胶产率,提高黄原胶生产厂家竞争力和经济效益的 最重要途径。亚硝酸是一种良好的诱变剂,其诱变机 理是:亚硝酸主要作用于微生物的DNA,脱去碱基上的氨基而 造成突变。本文利用亚硝酸诱变处理黄单胞菌菌株,筛选黄原 胶高产黄单胞菌突变株,为提高黄原胶产率提供条件。

(1)初筛:参照出发菌株筛选方法对亚硝酸诱变得到的突变株进行初筛。
(2)摇瓶发酵:取培养后的菌液2.5 mL接人100 mLYGB培 养基的锥形瓶中,在28 t、180 rpm环境条件下摇床培养。
(3)黄原胶的提取:将发酵所得的发酵液于10 000 rpm 离心30 min,取上清液,加人2倍体积的95%乙醇,边加边 搅拌。在搅拌过程中,玻璃棒上会慢慢有絮状物体聚集,待絮 状物聚集完毕,将絮状沉淀捏干取出后于通风橱干燥1.5h, 然后用电子天平称重,计算其产胶率。
一般认为,野生菌株采用杀菌致死率在90%及以上的大 剂量诱变处理,单位存活菌数少,可提高筛选效率,在数量不多的正变株中有可能筛选到产量提高幅度大的突变株。
据亚硝酸浓度与黄单胞菌致死率关系的直线回归方程,致死 率为90%的亚硝酸浓度是231mmol/L;本实验选用250 mmol/L 的亚硝酸浓度进行诱变处理,以确保黄单胞菌致死率略大于 90%,提高筛选效率。
诱变的效果与诱变致死率有重要的相关关系。通常认 为致死率低于70%时的突变株正变率比较高,有利于筛选高产突变株。尽管致死率低于70%时,正变产量的突变株占突 变株总数的比例高,但由于致死率低,存活的细菌数量多,突 变株占存活细菌总数的比例很小,因此,用存活细菌总数来计 算总正变率时,低致死率诱变的总正变率实际上比高致死率诱 变的总正变率更低。另外,致死率高,存活菌少,可以大大减 少筛选工作量,加快筛选工作进度,故本实验采用90%以上 的高致死率诱变方法。
 
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